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四、叶绿体中的色素的提取和分离
1、原理:
叶绿体中的色素能溶解于有机溶剂(如丙酮、酒精等)。
叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同,溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快;反之则慢。
2、材料用具:新鲜的绿叶(菠菜的绿叶等)。干燥的定性滤纸,试管,棉塞,试管架,研钵,玻璃滤斗,尼龙布,毛细吸管,剪刀,药勺,量筒(10Ml),天平。无水乙醇,层析液(20份在60~90℃下分馏出来的石油醚、2份丙酮和1份苯混合而成。93号汽油也可代用),SiO2和CaCO3。
3、方法步骤:
(1)提取绿叶中色素:称取绿叶5g→剪碎置于研钵→放入少许SiO2和CaCO3→加入10mL丙酮→充分研磨→过滤→收集滤液(试管口用棉塞塞严);
(2)制备滤纸条:将干燥的滤纸剪成6cm长,1cm宽的纸条,剪去一端两角(使层析液同时到达滤液细线),在距剪角一端1cm处用铅笔画线;
(3)画滤液细线:用毛细管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线,干燥后重复划2-3次;
(4)分离色素:向烧杯中倒入3ml层析液(以层析液不没及滤液细线为准),将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁,轻轻插入层析液中,用培养皿盖盖上烧杯。
4、结果分析:色素在滤纸条上的分布如下图:
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